超分辨率熒光顯微成像技術(shù)對擬南芥核中 RNA polymerase II 富集狀態(tài)分析
“ RNA polymeraseII（RNAPII）負責大多數(shù)真核生物蛋白編碼基因的轉(zhuǎn)錄。分析RNAPII的拓撲分布和定量有助于理解其在細胞間期的功能。以前的研究表明，RNAPII分子在分化的擬南芥核的異染色質(zhì)中形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而不是像在哺乳動物核中觀察到的那樣組織在不同的 "轉(zhuǎn)錄工廠 "中。 ”
“ RNA polymeraseII（RNAPII）負責大多數(shù)真核生物蛋白編碼基因的轉(zhuǎn)錄。分析RNAPII的拓撲分布和定量有助于理解其在細胞間期的功能。以前的研究表明，RNAPII分子在分化的擬南芥核的異染色質(zhì)中形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而不是像在哺乳動物核中觀察到的那樣組織在不同的 "轉(zhuǎn)錄工廠 "中。 ”
近些年，超分辨率顯微鏡技術(shù)克服了這一障礙，使用不同的方法來區(qū)分位于同一衍射極限體積內(nèi)的熒光分子。其中之一稱為隨機光學(xué)重建顯微鏡 (STORM)，它基于單分子定位，通過在不同時間點隨機打開衍射受限體積內(nèi)的光開關(guān)熒光分子，因此它們的信號基本上不會重疊。當在空間中隔離時，可以通過定位其信號的中心位置來確定每個單獨熒光團的位置。然后從隨時間累積的眾多分子定位生成超分辨率圖像，提供 < 50 nm 的空間分辨率。
在本研究中，研究者主要借助STORM超分辨率顯微鏡來研究淋巴結(jié)中T細胞受體的空間分布，目前在國內(nèi)， 隨機光學(xué)重建顯微鏡STORM已成功實現(xiàn)商用 ，有需要STORM成像技術(shù)進行實驗研究的專家老師們， 請文末填寫問卷， 即可預(yù)約獲得 iSTORM 超高分辨率顯微成像系統(tǒng)試拍服務(wù)~
在這里，作者借助STORM成像，表明TGN/內(nèi)涵體定位的貨物銜接子AP-1，GGA2和epsinR，在近核高爾基體區(qū)域形成長度超過250納米的伸長結(jié)構(gòu)。作者的數(shù)據(jù)表明，TGN/內(nèi)涵體定位的貨物銜接子具有明顯的空間關(guān)系。空間分離的貨物銜接子GGA2和AP-1分別調(diào)節(jié)Frizzled6和Vangl2的分選，并且空間相關(guān)的貨物銜接子可以協(xié)同調(diào)節(jié)特定的分選過程。
本文介紹力顯智能現(xiàn)已發(fā)布的超高分辨率顯微成像系統(tǒng) iSTORM的主動鎖定功能就可以減少外界噪聲給成像造成的影響。
在此，作者提出了一種新的方法來觀察這些病原體在感染過程中的情況，從而避免了這些問題：通過對胞內(nèi)病原體鼠傷寒沙門氏菌進行生物正交標記，并通過使用這些生物正交組來引入與隨機光學(xué)重建顯微鏡STORM兼容的熒光團，并將其置于相關(guān)的光電子顯微鏡（CLEM）工作流程中，病原體可以在其宿主細胞環(huán)境鼠傷寒菌中成像，分辨率為20 nm。因此，STORM-CLEM方法提供了一種了解這些病原體感染過程的新方法。
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